高效液相色譜系統是一種基于色譜分離原理的分析技術，廣泛應用于藥物研發、環境監測、食品科學等領域。其核心優勢在于高分辨率、高靈敏度及快速分析能力。以下從前期準備、系統啟動、樣品處理、運行分析、數據處理及維護保養六個關鍵環節展開詳細描述：

　　一、前期準備階段

　　1. 流動相配制與凈化

　　- 根據實驗需求選擇合適溶劑(如甲醇、乙腈、水等)，按比例混合后經0.22μm濾膜真空脫氣，避免氣泡干擾泵的穩定性。

　　- 緩沖鹽溶液需現用現配，防止微生物滋生；強酸堿調節pH時需緩慢滴加并校準至目標值。

　　- *示例*：反相C18柱常用甲醇-水體系，正相硅膠柱則采用正己烷-異丙醇混合液。

　　2. 色譜柱選型與活化

　　- 依據待測物極性匹配固定相類型(如C18、苯基柱適用于非極性化合物，氨基柱用于糖類分析)。

　　- 新柱啟用前需用高比例有機相(如純甲醇)沖洗至少30分鐘，隨后過渡至工作條件平衡。舊柱再生時可采用梯度程序清除殘留雜質。

　　3. 標準品與樣品預處理

　　- 固體樣品需溶解于適當溶劑，液體樣本稀釋至線性范圍內；復雜基質(如血漿、土壤)需經SPE固相萃取或蛋白沉淀去除干擾物。

　　- 所有溶液經離心/過濾后裝入自動進樣瓶，避免顆粒堵塞管路。

　　二、系統啟動與參數設置

　　1. 硬件自檢與初始化

　　- 開啟電源后等待各模塊就緒(泵壓力穩定、檢測器預熱完成)，通過控制軟件核查泄漏報警、廢液桶容量等狀態。

　　- 安裝對應規格的保護柱+分析柱，注意進出口方向標識，擰緊接頭防止死體積產生。

　　2. 方法編輯與序列編排

　　- 設定流速(通常1.0~1.5mL/min)、柱溫箱溫度(±0.1℃精度)、檢測波長(DAD全波段掃描可選)。

　　- 梯度洗脫程序設計原則：起始高比例水相→逐步增加有機相比例→末期高比例有機相沖刷柱子。

　　3. 系統平衡驗證

　　- 注入空白對照連續進樣3次，觀察基線波動≤±1mAU視為達標；若出現鬼峰需延長平衡時間或更換流動相。

　　三、樣品分析執行

　　1. 自動進樣標準化操作

　　- 編程設定進樣體積(常規20μL，微量可降至1μL)、清洗次數(針內外壁各≥3次)。

　　- 特殊樣品采用“partial loop”模式減少交叉污染，高溫易分解物質啟用冷卻托盤功能。

　　2. 實時監控與應急響應

　　- 密切關注壓力曲線：突升可能源于管路堵塞，驟降提示滲漏；保留時間漂移超過±0.1min需排查流速誤差。

　　- 突發停電立即關閉高壓閥，來電后重新平衡系統再行檢測。

　　3. 質量控制穿插運行

　　- 每批插入QC標準品校驗儀器穩定性，RSD%>2%表明系統異常；中間校核對多點校正曲線有效性至關重要。

　　四、數據采集與解析

　　1. 色譜圖優化處理

　　- 運用平滑算法降低噪聲，手動扣除背景吸收；重疊峰啟用切線峰谷分割法定量。

　　- DAD檢測器可通過純度因子判斷共流出組分純度，MS聯用時提取特征離子流圖輔助定性。

　　2. 定量計算模型構建

　　- 外標法直接擬合濃度-峰面積曲線，內標法則選用結構類似物補償基質效應。

　　3. 報告生成與合規存檔

　　- GLP規范要求完整記錄原始數據、審計追蹤日志；PDF報告包含方法詳情、圖譜截圖及結論陳述。

　　五、系統關機與日常維護

　　1. 深度清洗流程

　　- 關機前切換至高比例有機相(如甲醇:水=9:1)沖洗60分鐘，再用純甲醇封存柱子。

　　- 每月一次大保養：拆洗在線過濾器，超聲清洗單向閥球體，更換老化peek管段。

　　2. 耗材壽命管理

　　- 建立泵密封墊更換臺賬(約200小時/次)，進樣針彎曲及時更換；氘燈能量衰減至初始值70%以下需更新。

　　3. 性能驗證周期表

　　- 季度執行系統適用性測試(理論塔板數≥2000，拖尾因子0.9~1.5)；年度計量溯源認證確保檢測結果法律效力。